【儀器設(shè)備新聞  專(zhuān)題推薦】超微量分光光度計(jì)常用于核酸純度分析、蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量，蛋白質(zhì)重復(fù)性不好是我們遇到的zui多的問(wèn)題。本文分享：超微量分光光度計(jì)影響蛋白質(zhì)測(cè)定準(zhǔn)確性和重復(fù)性不好的關(guān)鍵因素。

　　01

　　溫度導(dǎo)致樣品揮發(fā)

　　首先，液體的溫度與分子間引力有一定的關(guān)系。

　　溫度升高，分子間引力將減弱，表面張力也會(huì)隨之降低。這也解釋了為何低溫保存的核酸樣品，更易形成液柱。

　　所以，要得到理想的測(cè)試效果，首先要確保實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的溫度和濕度，要預(yù)防儀器本身的發(fā)熱對(duì)樣品的影響。

　　然而，一款擁有封閉式點(diǎn)樣臺(tái)的超微量分光光度計(jì)可避免這一問(wèn)題。

　　02

　　鹽

　　無(wú)機(jī)鹽作為一種非表面活性劑，具有水合作用，趨向于把水分子拖入水中,因此會(huì)增大表面張力，反之亦然。

　　因此，脫鹽或低鹽的樣品，表面張力會(huì)降低，常見(jiàn)于蛋白純化的流程。

　　例如在進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析或質(zhì)譜分析時(shí)，樣品需經(jīng)過(guò)脫鹽處理，這樣的樣品在進(jìn)行濃度測(cè)量時(shí)，并不容易形成液柱。

　　03

　　表面活性劑

　　蛋白提取過(guò)程中經(jīng)常使用的表面活性劑(清潔劑)，如SDS、Triton X100，會(huì)大幅降低樣品的表面張力，這些物質(zhì)常會(huì)殘留在樣本中，難以完全去除。

　　尤其一些非離子型表面活性劑對(duì)蛋白質(zhì)在界面吸附性的影響更加值得考慮。

　　04

　　固液接觸表面

　　當(dāng)使用移液器將微量樣品加載到點(diǎn)樣臺(tái)后，會(huì)出現(xiàn)液體與固體的接觸表面，點(diǎn)樣臺(tái)表面的親水/疏水性質(zhì)會(huì)影響液體的表面張力。

　　因此，使用拉伸法的主流品牌微量分光光度計(jì)，點(diǎn)樣臺(tái)表面具有疏水性涂層，會(huì)增大液體的張力。