【儀器設(shè)備網(wǎng) 行業(yè)應(yīng)用】本文參考2020版《中國(guó)藥典》2341 通則中的第五法使用LabTech SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)對(duì)常用根莖類藥材甘草中的農(nóng)藥進(jìn)行固相萃取，分別采用GC-MS、LC-MS檢測(cè)，建立了一套中藥農(nóng)殘的處理檢測(cè)方法，其中GC-MS組分別采用GCB/NH2柱凈化與HLB柱凈化樣品，兩種方法的回收率及平行性良好，加標(biāo)回收率分別為71.1%~101.2%和73.3%~106.7%，重復(fù)性RSD分別為1.2%~8.6%和1.3%~9.0%，LC-MS組采用HLB柱凈化樣品，加標(biāo)回收率為74.8%~113.4%，重復(fù)性RSD為2.3%~9.8%，均滿足藥典要求，適合2341第五法通則所規(guī)定中藥農(nóng)殘檢測(cè)。

　　1儀器設(shè)備及試劑

　　1.1儀器設(shè)備

　　SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)(萊伯泰科公司);7890B-5977B氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(安捷倫公司);SCIEX Exion LC?液相系統(tǒng)+ Triple Quad? 4500質(zhì)譜系統(tǒng)(SCIEX中國(guó)公司);MultiVap-10全自動(dòng)高通量平行濃縮儀(萊伯泰科公司);EV400VAC旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(萊伯泰科公司)。

　　1.2 試劑及耗材

　　乙腈(色譜級(jí));甲苯(農(nóng)殘級(jí));乙腈-甲苯混合溶液(3∶1)，現(xiàn)用現(xiàn)配;氯化鈉(分析純);蒸餾水;HLB固相萃取住(200mg，6mL，萊伯泰科);GCB/NH2固相萃取柱(500mg/500mg，6mL，萊伯泰科)33種農(nóng)殘混標(biāo)工作液：5μg/L，溶劑為乙腈，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢;磷酸三苯酯內(nèi)標(biāo)工作液：0.1mg/L，溶劑為乙腈，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢;30種農(nóng)殘混標(biāo)工作液：5μg/L，溶劑為乙腈，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢。

　　2實(shí)驗(yàn)方法

　　2.1樣品處理

　　稱取甘草粉末(過(guò)3號(hào)篩)5g，加氯化鈉1g，搖散后加入乙腈50mL，勻漿處理2min(每分鐘不低于12000轉(zhuǎn))，離心5min(每分鐘4000轉(zhuǎn))，取上清液，沉淀再加入50mL乙腈勻漿，離心，合并兩次上清液，旋蒸濃縮至3~5mL后，用乙腈定容至10mL。

　　2.2 GCB/NH2柱固相萃取法

　　將2.1制得的樣品各取2mL放入SPE 1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，按照?qǐng)D1所示的方法進(jìn)行樣品的固相萃取凈化步驟。收集洗脫液，旋蒸濃縮，用乙腈轉(zhuǎn)移并定容至2mL。

　　圖1 GCB/NH2柱固相萃取流程

　　2.3 HLB柱固相萃取法

　　將2.1樣品各取3mL放入SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，按照?qǐng)D2所示的方法進(jìn)行樣品的固相萃取凈化步驟，收集凈化液。

　　圖2 HLB柱固相萃取流程

　　2.4 基質(zhì)加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

　　基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：分別按照2.2、2.3制備空白基質(zhì)溶液，各取1mL(每種方法所得樣品平行6份)至MultiVap-10全自動(dòng)高通量平行濃縮儀上，40℃濃縮至約0.6mL，分別加入10μL、20μL、50μL、100μL、150μL、200μL混標(biāo)工作液，加乙腈定容至1mL，混勻。按2.1方法準(zhǔn)備樣品，進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，5g樣品加標(biāo)1μg，然后分別按照2.2、2.3方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行6個(gè)平行樣品，用來(lái)測(cè)定加標(biāo)回收率及平行性。取處理好的樣品溶液(或基質(zhì)混標(biāo)溶液)1mL，GC-MS法精密加入內(nèi)標(biāo)0.3mL，LC-MS法精密加入水0.3mL，混勻待測(cè)。

　　2.5 GC-MS分析條件

　　2.5.1 氣相色譜條件

　　色譜柱：Agilent DB-5ms毛細(xì)管柱：30 m*250 μm*0.25μm;進(jìn)樣口溫度：270℃;柱溫程序：初始溫度100℃，以5℃/min升至180℃，保持5min，然后以5℃/min升至220℃保持6min，再以10℃/min升至280℃，保持5min。進(jìn)樣量：1 μL;進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣;流速：1.0mL/min;

　　2.5.2 質(zhì)譜條件

　　離子源溫度：280℃;輔助加熱溫度：290℃;溶劑延遲：3min;掃描方式：全掃描(SCAN)方式用于定性/選擇離子掃描模式(SIM)用于定量。

　　2.5 LC-MS分析條件

　　2.6.1 液相色譜條件

　　色譜柱：Shim-pack Velox C18(2.7μm，2.1*100mm);流動(dòng)相：A: 0.1%甲酸溶液(含5 mmol/L 乙酸銨);B:乙腈-0.1%甲酸溶液(含5 mmol/L乙酸銨)(95:5);流速：0.4 mL/ min;柱溫：40℃;進(jìn)樣量：2 μL;洗脫梯度：0~1min，30%B;7min~8min，100%B;8.1~10min，30%B。

　　2.6.2 質(zhì)譜條件

　　離子源：ESI源，正離子模式;離子源參數(shù)：IS電壓：5500V 氣簾氣CUR:30 psi;霧化氣GS1:55 psi 輔助氣GS2:55 psi;源溫度TEM:550℃碰撞氣CAD:Medium。

　　3結(jié)果和討論

　　由表4、5、6可知，2020版《中國(guó)藥典》2341第五法GC-MS組中GCB/NH2柱固相萃取和HLB柱固相萃取的加標(biāo)回收率分別為71.1%~101.2%和73.3%~106.7%，重復(fù)性RSD分別為1.2%~8.6%和1.3%~9.0%，LC-MS組HLB柱固相萃取的加標(biāo)回收率為74.8%~113.4%，重復(fù)性RSD為2.3%~9.8%，均滿足藥典要求。綜上所述，萊伯泰科SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)、EV400VAC旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀及MultiVap-10全自動(dòng)高通量平行濃縮儀能夠高效、穩(wěn)定地達(dá)到實(shí)驗(yàn)的要求，適用于2020版《中國(guó)藥典》2341第五法中規(guī)定的中藥農(nóng)殘測(cè)定，適用于中藥甘草樣品的前處理實(shí)驗(yàn)。

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